ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。

ELISA試劑盒包含預(yù)包被酶標(biāo)板、檢測(cè)抗體、鏈酶親和素標(biāo)記的HRP、標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、TMB顯色液、終止液、洗液、封板膜、檢測(cè)緩沖液等10個(gè)成分。

實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)將試劑盒、樣本取出；室溫放置半小時(shí)，恢復(fù)至室溫。

第一步：ELISA緩沖液配制

吸取5毫升10x Assay Buffer緩沖液，至50ml離心管，吸取50ml20x洗液至1升量筒，加蒸餾水至1000毫升。

第二步：標(biāo)準(zhǔn)品溶解和稀釋

取出標(biāo)準(zhǔn)品，2000rpm 離心2分鐘，以便管壁上的粉末集中到管底，根據(jù)標(biāo)簽，加入一定的蒸餾水，蓋上蓋子，渦旋震蕩5秒，靜置10-30分鐘至粉末溶解，準(zhǔn)備8個(gè)1.5毫升的EP管，標(biāo)注S1至S7和空白，用于標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)策梯度稀釋?zhuān)?/p>

加入150微升標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，吸取150微升重溶的標(biāo)準(zhǔn)品，至S1中進(jìn)行2倍稀釋?zhuān)荡?0次混勻，渦旋震蕩5秒，從S1管中吸取150微升液體，至S2管中，吹打混勻，繼續(xù)以上步驟梯度稀釋至S2至S7；

第三步：稀釋檢測(cè)抗體

檢測(cè)抗體為100x濃縮液，所以吸取50微升檢測(cè)抗體，至5毫升1x Assay Buffer 震蕩混勻備用；

第四步：加樣

取出已恢復(fù)至室溫的酶標(biāo)板，加入300微升洗液，以洗去包被抗體保護(hù)劑，使包被抗體處于活性狀態(tài)，靜置浸泡30秒。洗板結(jié)束后，立即使用酶標(biāo)板，不要讓酶標(biāo)板干燥。