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    ELISA試驗中的溫育有哪些考究?

    發(fā)布時間: 2018-02-02  點擊次數(shù): 1381次

    什么是溫育?  
    ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響,即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后??乖贵w反響的完結(jié)需求有必定的溫度和時刻,這一保溫進(jìn)程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當(dāng)。
    溫育時刻的考究:
    ELISA屬固相免疫測定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)作。以抗體包被的夾心法為例,參加板孔中的標(biāo)本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時機(jī),只需zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐漸平衡的進(jìn)程,因而需經(jīng)擴(kuò)散才干到達(dá)反響的結(jié)尾。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的結(jié)合也相同如此。這就是為什么ELISA反響總是需求必定時刻的溫育。
    ELISA試劑盒溫育溫度的考究:
    溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是試驗室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的適宜溫度。在樹立ELISA辦法作反響動力學(xué)研討時,試驗標(biāo)明,兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1-2小時,產(chǎn)物的生成可達(dá)。為加速反響,可進(jìn)步反響的溫度,有些試驗在43℃進(jìn)行,但不宜選用更高的溫度??乖贵w反響4℃更為*,在放射免疫測定中多使反響在冰箱中過夜,以構(gòu)成zui多的沉積。但因所需時刻太長,在ELISA中一般不予選用。

    溫育保溫的考究:
    保溫的方法除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,一般均選用水浴,可將ELISA板置于水浴箱中,ELISA板底應(yīng)貼著水面,使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰,板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此刻可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱,ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱性杰出的資料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,zui終將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度,特別是在氣溫較低的時分更應(yīng)如此。無論是水浴仍是濕盒溫育,反響板均不宜疊放,以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響,操作時的室溫應(yīng)嚴(yán)厲約束在規(guī)則的范圍內(nèi),規(guī)范室溫溫度是指20-25℃,但具體操作時可根據(jù)說明書的要求操控溫育。室溫溫育時,ELISA板只需平置于操作臺上即可。應(yīng)留意溫育的
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